研究者們對潔凈工作臺無菌操作空間環境的要求越來越高,采用單純的紫外殺菌時間相對較長.借助無毒無害的化學殺菌劑輔助紫外殺菌將會有效地縮短殺菌時間,潔凈工作臺的利用更高效,同時也可延長紫外燈的使用壽命.
1.1 原料實驗室自制果汁,并在室溫下開蓋放置 36 h,果汁與空氣直接接觸,使果汁在自然環境條件下污染一定濃度的雜菌.
1.2 培養基普通營養培養基:胰蛋白胨 5 g,酵母浸粉 2.5 g,葡萄糖 1.0 g,瓊脂粉 15.0 g,pH 值 7.0,去離子水1 000 mL,121 ℃滅菌 30 min.
1.3 主要儀器與設備YXQ-LS-70A 型高壓滅菌鍋(上海博訊實業有限公司醫療設備廠);BGZ-240 型烘干箱(上海博訊實業有限公司醫療設備廠);SW-CJ-2D 型潔凈工作臺(上海博訊實業有限公司醫療設備廠);SPX-150B-Z型生化培養箱(上海博訊實業有限公司醫療設備廠).
1.4 含菌培養皿的準備本文采用直徑為 9 cm 的培養皿(表面積為 3.14×4.52=63.585 cm2),按照平板菌落計數法測定自制果汁中細菌污染情況,重復 3 次,取平均值.然后吸取自制飲料 1.0 mL 均勻涂布至普通培養基上,涂布后的含菌培養基上細菌分布密度可由公式(1)計算得到.含培養基上細菌分布密度(CFU?cm-2) = 自制果汁中細菌總數(CFU?mL-1)培養皿表面積(cm2)
1.5 潔凈工作臺乙醇輔助紫外殺菌效果的確定將 21 個含菌培養基分為 7 組,分別置于潔凈工作臺(操作空間為 1150×500×500 mm)中,將培養皿蓋打開,然后開啟紫外燈(40 W)照射 30 min,每隔 5 min 取出 1 組培養皿.潔凈工作臺中均勻噴入 10 mL 75%乙醇溶液,然后按照上述方法將開蓋的含菌培養基置于潔凈工作臺中紫外燈照射 30 min,未經紫外線照射的作為陰性對照,取出的培養皿于 37 ℃條件下培養 24 h,進行細菌總數計數,取 3 次重復的平均值.1.6 潔凈工作臺無菌環境維持時間的確定將開蓋的含菌培養基置于潔凈工作臺中,采用乙醇輔助紫外線照射 25 min,然后將紫外燈關閉,培養皿繼續置于潔凈工作臺中 48 h,每隔 12 h 取出 1 組培養皿,置于 37 ℃下培養 24 h,進行菌落計數,每組 3個重復,取平均值.